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紫外可見分光光度計(jì)的使用細(xì)節(jié)

發(fā)布時(shí)間:2025-05-19

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  紫外可見分光光度計(jì)是分析化學(xué)中常用的精密儀器,用于測(cè)定樣品對(duì)紫外-可見波段(200-800 nm)光的吸收特性。其操作涉及光學(xué)系統(tǒng)、電子元件和化學(xué)樣品的協(xié)同配合,需嚴(yán)格遵循規(guī)范流程以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和儀器穩(wěn)定性。以下是其使用細(xì)節(jié)的系統(tǒng)性總結(jié):
  一、開機(jī)前準(zhǔn)備
  1. 環(huán)境檢查
  - 儀器需放置在平穩(wěn)臺(tái)面,避免振動(dòng)和強(qiáng)磁場(chǎng)干擾。
  - 室溫建議控制在15-25℃,濕度低于60%,防止光學(xué)元件受潮或結(jié)露。
  - 避免陽(yáng)光直射或強(qiáng)光照射,關(guān)閉儀器周圍其他光源。
  2. 儀器狀態(tài)確認(rèn)
  - 檢查電源電壓是否符合要求(通常為220V±5%)。
  - 清理樣品室,確保無(wú)殘留液體或固體雜質(zhì)。
  - 檢查比色皿是否清潔干燥,石英皿(用于紫外區(qū))和玻璃皿(用于可見區(qū))需分類放置。
  二、開機(jī)與預(yù)熱
  1. 啟動(dòng)程序
  - 打開主機(jī)電源,啟動(dòng)配套軟件(如配備電腦控制)。
  - 部分儀器需單獨(dú)開啟氘燈(紫外光源)和鎢燈(可見光源),注意點(diǎn)亮順序(通常先開氘燈,后開鎢燈)。
  2. 預(yù)熱與校準(zhǔn)
  - 預(yù)熱:開機(jī)后需預(yù)熱15-30分鐘,使光源穩(wěn)定、電子系統(tǒng)達(dá)到熱平衡。
  - 波長(zhǎng)校準(zhǔn):
  - 紫外區(qū)(200-400 nm):使用鈥玻璃(Hollow Cathode Lamp, HCL)的標(biāo)準(zhǔn)特征峰(如279.5 nm、365.0 nm)校準(zhǔn)。
  - 可見區(qū)(400-800 nm):使用鐠釹濾光片(Pr-Nd Glass)校準(zhǔn),特征峰為585 nm和800 nm。
  - 校準(zhǔn)時(shí)需將參比溶液(如蒸餾水或空白溶劑)置于樣品池,調(diào)整波長(zhǎng)至標(biāo)準(zhǔn)峰位,誤差應(yīng)小于±0.5 nm。
  三、樣品制備與裝載
  1. 比色皿選擇與處理
  - 紫外區(qū)(200-400 nm):必須使用石英比色皿,避免玻璃對(duì)紫外光的吸收干擾。
  - 可見區(qū)(400-800 nm):可使用普通玻璃比色皿。
  - 清潔方法:
  - 石英皿:用1:1硝酸浸泡24小時(shí),清水沖洗后用超純水潤(rùn)洗,再用無(wú)水乙醇擦拭,晾干或氮?dú)獯蹈伞?/div>
  - 玻璃皿:用洗滌劑清洗,清水沖凈后擦干。
  - 注意:手持比色皿時(shí),僅觸摸兩側(cè)毛面,避免指紋或油污附著透光面。
  2. 樣品加載
  - 液體樣品需倒入比色皿至約2/3高度,避免過(guò)滿溢出。
  - 固體樣品需配制成均勻懸濁液或溶解液,離心后取上清液測(cè)試。
  - 裝樣后用鏡頭紙輕拭外部水漬,保持透光面清潔。
  四、測(cè)量參數(shù)設(shè)置
  1. 波長(zhǎng)范圍與帶寬
  - 根據(jù)樣品特性選擇掃描范圍(如核酸測(cè)260 nm,蛋白質(zhì)測(cè)280 nm)。
  - 帶寬設(shè)置需平衡靈敏度與分辨率:
  - 窄帶寬(0.1-1 nm):適用于精細(xì)光譜分析(如峰值定位)。
  - 寬帶寬(2-5 nm):用于快速掃描或低濃度樣品。
  2. 基線校正
  - 以空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液)為參比,調(diào)零(調(diào)節(jié)透射率為100%或吸光度為0)。
  - 若樣品信號(hào)較弱,可啟用“暗電流校正”功能,消除檢測(cè)器噪聲。
  3. 掃描模式與速度
  - 定量分析:固定波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度(A)。
  - 定性分析:全波長(zhǎng)掃描(如200-800 nm),掃描速度建議設(shè)為中速(如200 nm/min),避免過(guò)快導(dǎo)致信號(hào)失真。
  五、測(cè)量操作要點(diǎn)
  1. 比色皿定位
  - 放入樣品池時(shí),確保比色皿標(biāo)記對(duì)準(zhǔn)光路方向(部分儀器需固定透光方向)。
  - 多樣品測(cè)試時(shí),按濃度梯度從低到高依次測(cè)量,避免高濃度樣品殘留影響低濃度結(jié)果。
  2. 數(shù)據(jù)記錄
  - 記錄吸光度(A)、透射率(T%)、波長(zhǎng)(λ)及測(cè)試日期、樣品名稱等信息。
  - 重復(fù)測(cè)量3次取平均值,RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)應(yīng)小于1%。
  3. 異常處理
  - 若吸光度超出線性范圍(A>1.5或A<0.01),需稀釋或濃縮樣品后重新測(cè)試。
  - 基線漂移時(shí),檢查光源強(qiáng)度(氘燈/鎢燈是否老化)、比色皿是否污染或參比溶液是否失效。
  六、關(guān)機(jī)與維護(hù)
  1. 關(guān)機(jī)步驟
  - 先關(guān)閉氘燈和鎢燈,待散熱風(fēng)扇停止后關(guān)閉主機(jī)電源。
  - 拔下電源插頭,蓋好防塵罩。
  2. 日常維護(hù)
  - 每次使用后清潔樣品室,定期用無(wú)水乙醇擦拭光源窗口和檢測(cè)器窗口。
  - 每月檢查氘燈使用時(shí)長(zhǎng)(通常壽命為1000-2000小時(shí)),及時(shí)更換老化燈泡。
  - 每季度校準(zhǔn)波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確性,使用標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀溶液)。
  3. 長(zhǎng)期存放
  - 儀器內(nèi)放置干燥劑,避免光學(xué)元件受潮霉變。
  - 切斷電源,罩上防塵布,存放于陰涼干燥處。
  七、安全注意事項(xiàng)
  1. 避免直視光源,尤其是紫外光,需佩戴防護(hù)眼鏡。
  2. 測(cè)試揮發(fā)性、腐蝕性或有毒樣品時(shí),應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,并戴手套。
  3. 比色皿清洗廢液需按實(shí)驗(yàn)室規(guī)范處理,禁止隨意傾倒。

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